Skocz do zawartości

Liczenie drożdży


coder

Rekomendowane odpowiedzi

Może jak sobie ładnie opiszę procedurę liczenia drożdzy, to się wreszcie za to zabiorę:

 

1. Przygotowanie roztworu drożdzy - gęstwę trzeba rozcieńczyć zwykle 1:1000, żeby nie było za dużo drożdzy w polu mikroskopu.

 

- przygotowyjemy 3 sterylne probówki, w każdej po 9 ml wody. Oznaczamy je 10, 100, 1000.

- do pierwszej przenosimy pipetą 1ml gęstwy, mieszamy. To jest 1:10

- do drugiej przenosimy pipetą 1ml z pierwszej probówki, mieszamy. To jest 1:100

- do trzeciej przenosimy pipetą 1ml z drugiej probówki, mieszamy. To jest 1:1000

 

2. Przygotowujemy błękit metylowy do barwienia martwych komórek:

- odważamy 0.1 grama błękitu i dodajemy wody destylowanej do objętości 100 ml, dostajemy roztwór 0.1%

- przed liczeniem mieszamy 1ml drożdży rozcieńczonych 1:1000 z 1ml roztworu. Ale to chyba nam zwiększy rozcieńczenie do 1:2000 ?

- czekamy 2 minuty - martwe drożdże zabarwią się na ciemnoniebiesko, żywe na jasnoniebiesko

 

3. Liczymy

Potrzebujemy mikroskop 1 do 400, i hemacytometr.

- mieszamy próbkę porządnie

- napełniamy hemacytometr pipetą

- pod mikroskopem widać siatkę 5 na 5 kwadratów, liczymy tylko w 5 kwadratach: 4 narożnych i środkowym. Notujemy też ilość martwych komórek. Nie liczymy komórek przecinających górną i lewą krawędź kwadratu.

 

wzrór na wyliczenie:

Drożdży na ml jest = ilość policzonych komórek * 5 * stopień rozcieńczenia ( zwykle 1000) * 10000

 

Jezeli drożdże nie rozłożyły się równomiernie, liczymy we wszystkich 25 kwadratach, i wtedy nie mnożmy przez 5.

 

żywotność oceniamy jako % = (wszystkie - martwe)/ wszystkie * 100 %

 

Proste? Proste. Do roboty.

Odnośnik do komentarza
Udostępnij na innych stronach

http://www.pg.gda.pl/chem/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/biologia_komorki/zajecia_wstepne.pdf

http://www.pg.gda.pl/chem/Katedry/Leki_Biochemia/dydaktyka/biofizyka/cz7.pdf

Liczenie komórek i oznaczenie żywotności należy wykonać oddzielnie. To drugie można zrobić na zwykłym szkiełku przedmiotowym i policzyć komórki w polu widzenia.

Odnośnik do komentarza
Udostępnij na innych stronach

Jeśli chcesz dodać odpowiedź, zaloguj się lub zarejestruj nowe konto

Jedynie zarejestrowani użytkownicy mogą komentować zawartość tej strony.

Zarejestruj nowe konto

Załóż nowe konto. To bardzo proste!

Zarejestruj się

Zaloguj się

Posiadasz już konto? Zaloguj się poniżej.

Zaloguj się
×
×
  • Dodaj nową pozycję...

Powiadomienie o plikach cookie

Umieściliśmy na Twoim urządzeniu pliki cookie, aby pomóc Ci usprawnić przeglądanie strony. Możesz dostosować ustawienia plików cookie, w przeciwnym wypadku zakładamy, że wyrażasz na to zgodę.